ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИИ HELICOBACTER PYLORI

 

 Сёмин С.Г., Сафонов А.Б., Филин В.А.

Кафедра пропедевтики детских болезней РГМУ.

 

Открытие Робина Уоррена и Барри Маршала, обнаруживших в 1983 году бактерии со слизистой желудка, позволило пополнить список этиологических факторов, вызывающих заболевания верхних отделов пищеварительного тракта (ВОПТ). Эти микроорганизмы вначале были отнесены к роду Campylobacter, однако позднее, в 1989 году, выделены в отдельный род - HELICOBACTER PYLORI (Нр). К настоящему времени выявлено 40 штаммов семейства хеликобактер, но роль в этиопатогенезе хронических заболеваний ВОПТ отводится Н.pylori.

Нр - грамотрицательная микроаэрофильная бактерия спиралевидной или изогнутой формы, обладающая множеством жгутиков, которые обеспечивают ей возможность передвигаться в слоях слизи эпителия желудка. Выявлено свойство Нр, выделять специфические ферменты (уреазу и каталазу) в количестве, которое намного превышает секреторные возможности других бактерий. Известно, что уреаза расщепляет мочевину, поступающую в желудок, на углекислый газ и аммиак, который, окружая, микроб, защищает его от бактерицидного действия соляной кислоты.

Микроорганизмы Нр способны осуществлять синтез белков: гемолизина, вауколизирующего цитотоксина, цитотоксического белка, а также белков, ингибирующих секрецию соляной кислоты и обладающих адгезивной способностью к рецепторам желудочных эпителиоцитов.

Под влиянием Нр происходит запуск каскадных реакций цитокинового ряда IL-8 с модулированием хемотаксиса, хемокинеза, агрегацией и высвобождением ферментов из нейтрофилов, что приводит к повреждению эпителия слизистой оболочки желудка. Влияние Helicobacter pylori приводит к замедлению миграции эпителия в случае образования дефекта, с последующей стимуляцией апоптоза. Это усиливает гибель клеток в краях язв и затрудняет их заживление. Снижение уровня эпидермального фактора роста при персистенции Нр вызывает задержку репарации, уменьшение синтеза простагландинов (PGE2), что приводит к нарушению микроциркуляции и трофики тканей.

            Путями передачи хеликобактерной инфекции являются фекально-оральный и орально-оральный. Хотя можно рассматривать и ятрогенный путь передачи, например, при нарушении противоэпидемических мероприятий при проведении рН-метрических и эндоскопических исследований.

По мнению ряда исследователей для H.pylori, как для многих других возбудителей детских инфекций (например, стрептококки), характерным периодом контаминации является дошкольный возраст, на что оказывают влияние различные факторы, в том числе и внутрисемейная распространенность H.pylori. Более высокому уровню инфекции сопутствует низкие социально-экономический статус и  уровень образования.

При эпидемических исследованиях среди детей, достигших 15 летнего возраста, уровень инфицированности в разных странах варьировал от 20% до 80%. Важно отметить, что заражение H.pylori-инфекцией среди взрослых встречается крайне редко и составляет не более 0,5% за год. Заселение слизистой оболочки желудка H.pylori в раннем возрасте постепенно формирует хронический воспалительный процесс, который начинает реализовываться неспецифическими синдромальными проявлениями со стороны ВОПТ у детей старшего возраста.

Подавляющее большинство лиц инфицированных H.pylori-инфекцией на момент диагностики не имеют клинически выраженной симптоматики болезни, но они представляют группу риска по формированию весьма тяжелых, а нередко и угрожающих жизни заболеваний, ассоциированных с данной инфекцией.

На совещании Европейской группы по изучению H.pylori, проведенном в 1996 году в городе Маастрихе, был предложен перечень заболеваний, при которых показана эрадикация H.pylori, в том числе язва желудка и двенадцатиперстной кишки (активная и неактивная), мальтома, гастрит с тяжелыми проявлениями, пострезекционное состояние по поводу рака желудка.

Вторая группа заболеваний, при которых эрадикация H.pylori желательна - это функциональная диспепсия, рак желудка в семейном анамнезе, состояние после длительного лечения ингибиторами протонной помпы (PPI), нестероидная и противовоспалительная терапия, постхирургическое состояние после резекции язвы двенадцатиперстной кишки.

Третья группа пациентов, которых можно считать носителями с «неопределенными»  показаниями для эрадикации H.pylori: с асимптомным течением и выявление H.pylori  при других состояниях (вне ЖКТ), например задержка роста, аллергические проявления, нарушение менструального цикла у девочек и др.

Для анализа новых данных, полученных при изучении Нр, в 2000 году была проведена вторая Маастрихская конференция. В рекомендациях конференции отражены принципы доказательной медицины. Основные позиции итогового документа посвящены следующему:

-         диагностике и лечению H.pylori - инфекции на поликлиническом этапе

-         ведению пациентов с H.pylori – ассоциированной патологией на этапе специализированной медицинской помощи

-         H.pylori – инфекция как проблема общественного здоровья

-         показаниям  к проведению эрадикационной терапии

-          схемам эрадикационной терапии

Врачи должны владеть информацией о необходимости определения и возможностях диагностики микроорганизма Нр. Если этиологической причиной заболевания считается H.pylori, то перед началом проведения противохеликобактерной терапии необходимо определить возбудителя.

В связи с получением четких клинических доказательств эффективности эрадикационной терапии при язвенной болезни, ассоциированной с Нр, в настоящее время рекомендована стратегия “search and treat”  для тех пациентов, которые в течение длительного времени получали длительную антисекреторную терапию без антибактериальной терапии. Практический врач должен уметь выявлять (“search”) таких пациентов и назначать им адекватную терапию  (“treat”).

Инфицирование H.pylori происходит в детском возрасте и, как правило, при внутрисемейном контакте с длительно персистирующим микроорганизмом. Это указывает на необходимость соответствующего обследования и наблюдения за семьей, в которой проживает ребенок.  

В Маастрихских соглашениях (1996 г.) и (2000 г.) представлены рекомендуемые показания к лечению Нр-ассоциированных заболеваний.

Таблица 1

Кого лечить: строго рекомендуемые показания

в соответствии с Маастрихским консенсусом-2

 

Показания (H.pylori-пациенты)

Научная доказательность  

Дуоденальная/желудочная язва (активная или неактивная, включая осложненное течение)

1

MALT – лимфома

2

Атрофический гастрит

2

Состояние после резекции желудка по поводу рака

3

Пациенты, являющиеся родственниками первой линии пациентов с раком желудка

3

 

В правой графе таблицы указаны степени научной доказанности показаний для проведения антихеликобактерной терапии. Под цифрой «1» подразумевается самая высокая степень доказанности для проведения специфического лечения, цифра «2» предполагает достаточно высокую степень обоснованности рекомендаций, значение «3» предполагает назначение терапевтических рекомендаций по отношению Нр-инфекции обязательно с учетом наличия в анамнезе контакта с родственником, у которого рак желудка и после резекции желудка по поводу рака.

Таблица №2

Кого лечить: желательные показания

в соответствии с Маастрихским консенсусом-2

Показания (H.pylori-пациенты)

Научная доказательность  

Функциональная диспепсия

2

ГЭРБ

3
Применение НПВП

2

 

            В таблице 2 представлены показания, для которых Маастрихским консенсусом-2, предложены желательные показания к назначению антихеликобактерной терапии и степень научной доказанности по результатам проведенного метаанализа литературных данных.  

Приведенные рекомендации в большей степени относятся к взрослым, чем к детям, так как такие заболевания как мальтома или рак встречаются в основном у взрослых. Однако атрофические процессы слизистой оболочки желудка у детей под влиянием Нр могут формироваться значительно быстрее, чем у взрослых, что может быть предрасполагающим фактором для развития пролиферативных процессов в слизистой, в том числе и рака желудка уже во взрослом состоянии.

По результатам литературных данных и собственных исследований предложены мероприятия по предупреждению осложнений при Нр-инфекции.

            Мероприятия, направленные на предупреждение осложнений Нр-инфекции

- Выявление генетических особенностей микроорганизма Н.pylori

 

- Выявление генетических особенностей макроорганизма

- Достоверная ранняя диагностика Нр-инфекции

- Определение возможных исходов предполагаемой терапии

- Контроль за проведенной терапией

- «Семейный подход» к обследованию и терапии Нр-инфекции

- Разработка вакцины

Из перечисленных выше мероприятий, предупреждающих осложнения Нр, особое значение отводится диагностике Нр-инфекции.

            Лабораторная диагностика хеликобактерной инфекции во многих странах мира в настоящее время получила широкое распространение. В России это направление в практическом здравоохранении только начинает внедряться. В связи с чем отсутствие эффективной лабораторной диагностики в стране не позволяет судить о распространенности Нр-инфекции в России среди больных гастродуоденальной патологией и его эпидемиологической значимости. Хотя во многих работах отечественных авторов представлены результаты исследований по этой проблеме, но пока они остаются отчетами исследователей о проделанной работе на небольшой группе пациентов. Решение вопроса об эффективной диагностике Нр затруднено отсутствием единого подхода к выявлению Нр.

Рекомендуемые методы диагностики H.pylori

1.     Бактериологический метод

2.     Морфологический метод

3.     Дыхательный уреазный тест

4.     Уреазный тест

5.     Молекулярный метод - полимеразная цепная реакция

6.     Серологический метод – ИФА

7.     Скрининг-методы (основанные на разных принципах работы)

 

Методы диагностики можно разделить по признаку инвазивности (эндоскопической) при получении материала исследования: инвазивные и неинвазивные.

Методы диагностики H.pylori – 1

Инвазивные

Неинвазивные

·        Бактериологический метод (материал – биоптат СОЖ или 12-ти перстной кишки)

·        Гистологический метод (материал – биоптат СОЖ или 12-ти перстной кишки)

·        Уреазный тест

(материал – биоптат СОЖ или 12-ти перстной кишки)

·        Молекулярный метод

(материал – биоптат СОЖ или 12-ти перстной кишки, желудочный сок)

 

·        Дыхательный уреазный тест

(материал – выдыхаемый воздух пациента, после приема мочевины меченной  изотопами углерода: С13,      С14)

·        Молекулярный метод

(материал – зубной налет, копрофильтраты)

·        Серологические методы

(материал – сыворотка крови)

 

Методы диагностики Нр условно можно разделить на прямые, которые определяют возбудитель или его генетический материал, и непрямые (косвенные), которые выявляют продукты метаболизма микроорганизма.

Методы диагностики H.pylori –2

Прямые

Непрямые (косвенные)
  • Бактериологический метод
  • Морфологический метод
  • Молекулярный метод
  • Уреазные тесты

 (дыхательный,  с биоптатом)

  • Серологические методы

 

Бактериологический метод.

Данный метод является «золотым стандартом» диагностики Нр-инфекции. Он основан на идентификации возбудителя путем посева из биоптата СОЖ или ДПК. Полученные при эндоскопии биоптаты помещают в пробирки с транспортными средами: Cary-Blaer или Pylori-средой. Посев материала желательно проводить в день его поступления в лабораторию. Для культивирования и выделения H.pylori используется неселективная среда (колумбийский агар – 43 гр., дистиллированная вода - до 1000 мл, 100 мл цельной крови барана) и селективная среда (колумбийский агар - 43 гр., дистиллированная вода - до 1000 мл, 100 мл цельной крови барана, полимиксина В-2500 UI/л, ванкомицин-10 мг/л триметоприм -5мг/л, амфотеррицин-10 мг/л, трифенилтетразол хлорид (ТТХ)-40 мг/л среды.

Типичные колонии - негемолитические, плоские, реже выпуклые, подобные каплям росы, влажные, прозрачные или полупрозрачные, с блестящей поверхностью на чашке с неселективной средой и с золотисто-желтым отливом на чашке с селективной средой. При микроскопии мазков окрашенных по Граму - клетки H.pylori грамотрицательные, мелкие, изогнутые или спиралевидные. При микроскопии в темном поле клетки H.pylori обладают характерной стремительной подвижностью.

Для изучения чувствительности H.pylori к кларитромицину, амоксициллину и метронидазолу используются следующие тесты: Е-тест, дискодиффузный метод, метод диффузии в агар для определения минимальной поглощающей концентрации (МПК). Несмотря на то, что этот метод самый точный, он редко используется в обычной клинической практике из-за длительности анализа (средняя продолжительность исследования 7 дней), сложности его постановки и высокой цены. Чаще всего бактериологический метод используют в качестве референсного для оценки точности других методов.

Морфологический метод.

Гистологический метод (ГМ) позволяет непосредственно визуализировать Нр. Используя специальные окраски: по Вартину-Старри, Гимзе, Генте можно добиться высокой вероятности микроскопической идентификации микроорганизмов по сравнению с окраской гематоксилином и эозином. Материалом исследования является биоптат СОЖ или ДПК. Преимуществом ГМ является простота исполнения, удобство хранения, транспортировки. При исследовании биоптата возможно определение степени обсемененности: выявление до 20 микроорганизмов в поле зрения - 1 степень, до 50 бактерий – 2 степень, свыше 50 бактерий 3 степень. Кроме этого оцениваются морфологические изменения слизистой оболочки, активность процесса с определением местонахождения полиморфноядерных лейкоцитов. Нейтрофилы могут инфильтрировать собственную пластинку, эпителий, заполнять просветы желез, образуя так называемые ямочные абсцессы. О хронизации процесса свидетельствуют лимфоциты, которые в норме в СОЖ содержатся не более 2-5 в поле зрения (объектив ×40) или 2-3 мононуклеара в одном валике. Наличие даже 1-2 плазмоцитов свидетельствует о хроническом воспалении. Для получения оптимальной информации рекомендуется обязательно проводить множественные биопсии. Их должно быть не менее пяти: по две из антрального отдела (2-3 см от привратника по большой и малой кривизне), по две из тела желудка (по большой и малой кривизне, примерно в 8 см от кардии) и по одной из угла желудка. Биопсии из тела важны при контроле за лечением. При неудачной антихеликобактерной терапии и лечении блокаторами протонового насоса Нр нейтрофилы часто исчезают из антрума, но появляются в теле желудка. Необходимо помнить, что ценность диагностической эндоскопии без правильно взятых биопсий весьма сомнительна, так как сама по себе не способна дать нозологического диагноза. Однако кроме достоинств у гистологического метода есть и свои недостатки: обнаружить Нр удается только на достаточно тонких и хорошо окрашенных средах. Трудно обнаружить Нр при его низкой обсемененности. Сложно отличить кокковую форму Нр от других форм микроорганизмов, которые тоже могут иметь спиралевидную форму.

Цитологический метод является одним из вариантов гистологического исследования. Материалом являются мазки-отпечатки биоптатов СОЖ, взятых при ЭГДС, которые в последующем высушиваются  и окрашиваются по методу Романовского-Гимзе.

Возможные морфологические изменения, характерные для инвазии H.pylori.

1.        Бактерии образуют межгликокалисные связи с клеточной мембраной без ее нарушения.

2.           Плотный контакт бактериальной оболочки и клеточной мембраны вплоть до слияния их мембран.

3.           Инвазия бактерии в собственную пластинку СО (как правило возникает при снижении общего иммунитета)

Метод флуоресцентной гибридизации in situ предоставляет возможность совершенствовать морфологическое определение микроорганизма. Для этого исследуемые срезы обрабатывают нуклеотидами с флуоресцентной меткой. Меченые нуклеотиды могут быть подобраны для детекции 16S рибосомальной РНК (определение Нр) или определения 23S рибосомальной РНК (выявление резистентности к макролидам).

 

Молекулярный метод.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) впервые была осуществлена в 1985 году на фирме Cetus, а последующее использование в ПЦР термостабильной ДНК-полимеразы существенно расширило возможности её применения в научных целях, и в клинике.

ПЦР метод, который позволяет найти в исследуемом материале небольшой участок генетической информации и многократно размножить его. Метод ПЦР основан на принципе естественной репликации ДНК и комплементарного дополнения обеих цепей ДНК. Репликация ДНК может начаться не в любой точке, а только  в определенных стартовых блоках – коротких двунитевых участках. Суть метода заключается в том, что, маркировав такими блоками специфический только для данного вида участок ДНК, можно многократно воспроизвести (амплифицировать) именно этот участок.

Принцип метода.

Для того чтобы осуществить такой процесс  в пробирке, используют две генетические пробы, называемые праймерами, которые и служат в качестве затравки для синтеза выбранного участка ДНК. При внесении в исследуемую пробу праймеры подобно паре генетических детективов «прочесывают» раствор в поисках участка, которому они комплементарны и, следовательно, способны присоединится, образовав двунитчатый стартовый участок. После присоединения (отжига) праймеров начинается  воспроизведение с помощью фермента Tag–полимеразы специфического участка ДНК. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации – это и есть цепная реакция в ПЦР. В результате количество копий фрагмента увеличивается в геометрической прогрессии и через 25 циклов амплификации синтезируются 106 степени копий фрагмента. В течение 30-40 циклов нарабатывается количество ДНК, достаточное, чтобы учитывать результаты реакции после электрофореза в агарозном геле.

Материалом для исследования являются биоптат СОЖ или ДПК, а также желудочный сок. При заборе биоптатов для постановки ПЦР необходимо отбирать материал из антрального отдела желудка, наиболее излюбленное место прикрепления к эпителиоцитам, и фундального отдела желудка (в 10% случаев местом локализации Нр является именно дно желудка). Верификация микроорганизма ПЦР позволяет не только дать ответ на вопрос о наличии бактерии, но и выявлять маркеры генов «острова патогенности» - Cag, Vac, ice и др. Выделенная из биопсийных материалов ДНК Нр может быть использована для точечных мутаций в позиции 2142 и 2143 гена 23S РНК, ответственных за устойчивость к макролидам.

Проводятся перспективные исследования по модификации молекулярного метода с появлением новых технологий и современного оборудования. “Real-time” ПЦР продолжение совершенствования молекулярной диагностики с использованием прибора типа LightCykler, который позволяет в реальном времени осуществлять детекцию Нр и его мутации, приводящие к резистентности к антибиотикам.

Большое внимание уделяется исследованиям по выявлению ДНК Нр с последующей детекцией из копрофильтратов. Развитие данного направления, в случае получения достоверных результатов, значительно упростило бы диагностику Нр-инфекции с использованием неинвазивного метода. Однако пока существуют технологические трудности разработки данной методики.

Уреазные тесты.

Уреазные тесты основаны на выявлении высокой эндогенной активности фермента уреазы, вырабатываемой H.pylori. Под воздействием уреазы Нр мочевина желудочного содержимого катализируется на ионы аммония и угольной кислоты. Гидролиз мочевины завершается образованием щелочных продуктов, что приводит к алконизации и локальному повышению рН. Этот механизм является важным звеном защиты микроорганизма от агрессивных факторов макроорганизма, что приводит к образованию перифокального «аммиачного облака» нейтрализующего HCl желудочного содержимого. Интенсивность экспрессии фермента превышает в 2-10 раз аналогичные свойства других микроорганизмов и является ведущим энзимологическим маркером Нр-инфекции.

1. Дыхательный уреазный тест.

В исследованиях по определению H.pylori применяется дыхательный «Хелик-тест». Суть метода заключалась в том, что через индикаторную трубку при помощи электрического насоса пропускают выдыхаемый воздух пациента. Затем дают выпить больному 10 мл 5% водного раствора карбамида (0,5 г). Через 5 минут повторяется процедура измерения с другой стороны той же индикаторной трубки. Оценивается прирост концентрации аммиака (разница между первым и вторым темно-синим столбиком, образующимся в индикаторной трубке по результатами «прохождения», аспирируемого воздуха). Если прирост концентрации аммиака будет превышать 0,5 мг/мл, то тест на H.pylori считается положительным.

2. Быстрый уреазный тест

Биопсийный материал СОЖ помещается  в жидкую среду теста. Стандартной средой для быстрой диагностики Нр является 2% бульон мочевины по Кристенсену. В состав жидкой среды входит мочевина и индикатор. Мочевина ферментируется  уреазой  H.pylori на аммиак и углекислый газ, вызывая изменение рН среды, в результате чего индикатор окрашивается от желтого до малинового цвета.  Экспозиция биоптата в среде занимает от 5 до 25 минут.

3.        CLO-тест

            Разновидность уреазного теста промышленного изготовления. Представляет собой гелеобразную таблетку, содержащую мочевину, феноловый красный (индикатор рН) и бактериостатический агент. Биоптат помещают на поверхность таблетки. При наличии в исследуемом материале уреазы, мочевина гидролизируется, защелачивая среду. Это приводит к изменению окраски - от желтой до малиновой. Оценка результата проводится через 20 минут.

Для повышения специфичности метода предложен тест, который позволяет определять при комнатной температуре уреазную активность лишь накопленную в тканях, а не вырабатываемую микроорганизмами в процессе культивирования. Данная методика получила название «холодных» тестов. Представителем этой разновидности является тест на основе твердого волокнистого носителя – Хелпил-тест. Гигроскопический материал теста адсорбирует жидкость из биоптата, помещенного на него, биохимическая реакция происходит только под материалом и, как считают разработчики теста, является равнозначным с количеством уреазы и реакционной средой, что повышает чувствительность метода. Специфичность и чувствительность  Хелпил-теста  у  детей составляет до 95%.

 

Радионуклидный метод.

В основе метода лежит регистрация изотопов углерода С13, С14 в выдыхаемом воздухе. Проба проводится натощак. Перед приемом мочевины, с мечеными углеродами, у пациента отбирают 2 пробы с интервалом в 1 минуту. Затем пациент принимает внутрь лёгкий пробный завтрак и тестируемый субстрат, содержащий мочевину, меченную С13 , С14. В течение 1 часа с интервалом 15 минут собирают 4 пробы выдыхаемого воздуха в специальную пробирку-контейнер. Концентрацию С13, С14 в полученных образцах,  исследуют на масс-спектрометре. Полученные данные выражают в процентах и соотносят со степенью инфицированности.

Легкая степень – менее 3,5 % С13 или С14  в выдыхаемом воздухе

Средняя степень – 3,5-6,4% С13 или С14  в выдыхаемом воздухе

Тяжелая степень – 6,5% - 9,4% С13 или С14  в выдыхаемом воздухе

Крайне тяжелая степень – более 9,5% С13 или С14  в выдыхаемом воздухе

 

Нормальным содержанием С13 или С14  в выдыхаемом воздухе считается не более 1% от общего содержания СО2 .

Разновидностью радиоизотопного метода диагностики Нр является определение изотопа N15 в моче обследуемого. Метод неинвазивный и с высокой чувствительностью и специфичностью, привлекает внимание как перспективный для использования в педиатрии.

 

Серологический метод.

Иммунологическая диагностика Helicobacter pylori основывается на определении антител разных классов, которые продуцируются под воздействием антигенов, расположенных на клеточной мембране и жгутиках микроорганизма.

            На сегодняшний день разработано большое количество методов серологической диагностики. Разновидностью этих методов является ИФА – иммуноферментный анализ, относительная простота в исполнении которого, позволяет проводить широкие эпидемиологические обследования до начала лечения.

Определение специфических антител к Helicobacter pylori методом ИФА выявляет факт инфицирования не только при манифестных, но и субклинических формах инфекции, а также в стадии ремиссии заболевания. Иммунологические тесты диагностики используются для проведения эпидемиологических исследований и при длительном (на протяжении нескольких лет) наблюдении за больными после лечения. Тест остается положительным после лечения до 6 месяцев. Поэтому для контроля за эрадикацией Нр-инфекции серологические тесты использованы быть не могут.

Принцип метода ИФА основан на том, что на поверхности полистероловых планшетов или шариков (твердая фаза) сорбирован антиген к H.pylori. После инкубации сыворотки с твердой фазой соответствующие антитела  H.pylori (в случае их наличия в сыворотке крови) связываются с сенсибилизированной полистероловой поверхностью. На следующем этапе к образовавшемуся комплексу антиген–антитело добавляют коньюгат пероксидазы хрена с антителами к тестируемому (сывороточному) компоненту иммунного комплекса. В случае искомого агента в крови возникает «сэндвич», содержащий антиген твердой фазы – тестируемое антитело сыворотки крови - антитело к тестируемому антителу, коньюгированное с пероксидазой. Добавление к образовавшемуся «сэндвичу» специального субстрата (ортофенилендиамин) обеспечивает проявление ферментной реакции и возникновение оранжевого окрашивания, учитываемого фотометрически. Интенсивность окраски субстратного раствора пропорциональна концентрации тестируемого маркера в сыворотке крови.

«Быстрая» серологическая диагностика проводится при помощи визуального экспресс-теста по определению в 2-х каплях цельной крови человека, а также в сыворотке или плазме IgG-антител к Helicobacter pylori одностадийным иммунохроматографическим методом. В экспресс-тесте применяют комбинацию таких специфических реагентов, как коньюгированные с красителем моноклональные антитела к IgG человека (нанесенные на мембрану, находящуюся внутри реакционной пластинки), высокоочищенные белки H.pylori, привязанные к мембране в районе тест-зоны, и козьи поликлональные антитела к IgG мыши в контрольной зоне. Образец материала наносится на диагностическую пластинку. При проникновении через адсорбционный слой к мембране, IgG человека связываются с коньюгатом, образуя иммунный комплекс. Если в нем присутствуют специфические  антитела к H.pylori, иммунокомплекс будет реагировать с белками H.pylori в тест-зоне с появлением красно-фиолетовой полосы. Избыток коньюгата проникает в контрольную зону и связывается с антимышиными антителами.

Оценка результатов анализа:

Результат считается отрицательным, если в верхней контрольной зоне окна видна только одна красно-фиолетовая полоса, демонстрирующая пригодность реагентов набора к работе.

Результат считается положительным, если в нижней тест-зоне окна появляется вторая красно-фиолетовая полоса, свидетельствующая о присутствии в образце Ig G-антител к H.pylori. Причем, даже слабоокрашенная полоса указывает на положительный результат.

Результат считается неопределенным, если отсутствует полоса в контрольной зоне.

Однако, использование у детей для диагностики Нр-инфекции «быстрых» серологических тестов ограничено тем, что до 10 лет результаты часто остаются отрицательными при наличии бактерий в слизистой оболочке желудка пациента. Возникает так называемый «серый коридор»,  когда визуализация инфекции затруднена и необходимо использовать другие методы диагностики.

Лабораторно-диагностические методы позволяют не только определить одну из причин гастродуоденальной патологии, но и контролировать эффективность лечения, оценивать эрадикацию возбудителя. Оценивая информативность, доступность и экономические затраты на проведение различных методов диагностики, небходимо отметить, что следует руководствоваться принципом выбора метода, который с большой вероятностью даст точный результат за короткое время, или если есть возможность сочетания методов, информационно дополняющих друг друга.

Таким образом, диагностика Нр-инфекции является необходимым этапом в работе с пациентом, страдающим гастродуоденальной патологией, ассоциированной с Нр-инфекцией. С позиции доказательной медицины эффективность эрадикации Нр необходимо подтверждать лабораторно-диагностическими методами. Широкое внедрение диагностических тестов в практическую медицину для детекции Нр-инфекции даст возможность разрабатывать профилактические мероприятия, направленные на снижение заболеваний, ассоциированных с Нр-инфекцией у детей и взрослых. Перспективный подход в диагностике данной инфекции, вероятно, будет включать не только определение возбудителя и его особенностей (генетические и как следствие биохимические свойства), но и состояние макроорганизма, его иммунологический статус. Дальнейшие исследования по оптимизации диагностических комбинаций позволят упростить контроль за одной из широко распространенных инфекций человечества.